布病BRUCELLA-IgM检测试剂盒（ELISA法）说明书

【广州健仑生物科技有限公司】供应药物滥用检测试剂，微生物检测试剂，生物安全检测试剂，违禁品检测试剂，食品安全检测试剂，热带病检测试剂，科研系统常用检测试剂，疾控系统常用检测试剂等…… 

仅供体外研究使用，不用于临床诊断

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人布鲁氏菌IgM抗体（Brucella Ab IgG）的含量。

有效期：12个月

保存条件：2-8℃

[检测原理]

试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人布鲁氏菌IgG抗体（Brucella Ab IgM）捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准 品、HRP标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人布鲁氏菌IgG抗体（Brucella Ab IgG）呈正相关。用酶标 仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

[样本处理及要求]

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝 素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组 织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组 织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组 织剪碎。将剪碎的组 织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组 织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白 酶抑制 剂）加入玻 璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组 织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

[需要而未提供的试剂和器材]

1.酶标 仪（450nm）

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离 子水

[试剂盒组成]

注：
1.  标准  品浓度依次为：80、40、20、10、5、2.5 ng/mL
2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过 标准 品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
[试剂准备]
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

[操作步骤]
1.从室温平衡20min后的铝 箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准 品孔和样本孔，标准 品孔各加不同浓度的标 准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准 品孔和样本孔中每孔加入辣 根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板5次（也可用洗 板机洗 板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

[实验结果计算]
以所测标准 品的OD值为横坐标，标准 品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

[试剂盒性能]
1. 检测范围：2.5 ng/mL – 80 ng/mL。
2. 灵敏度： 检测浓度小于0.1 ng/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

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布鲁氏菌病，也被称为布氏杆菌病、布病或者波状热，它属于一种由布鲁氏菌（Brucella）引发的动物源性传染疾病。该病会借助感染动物的排泄物，或者人类食用由受感染动物制成的食品而传播给人类。处于高风险状态的人群，有居住或前往疾病流行区域（像牧区）的人，因职业原因而暴露在布鲁氏菌环境下的人，例如屠宰场工人、肉类加工工人以及兽医等。这种病在 众多地区都有广泛流行，特别是在环地中海地区、东欧、拉丁美洲、非洲、亚洲、加勒比海地区还有中东地区。