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A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）使用说明书
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【产品名称】
通用名称：A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）
英文名称：Binax NOW® Strep A Test
【包装规格】25人份/盒。
【预期用途】
A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种快速免疫层析试验，用于定性检测咽拭子标本中的A群化脓性链球菌抗原。
A群链球菌是引起咽炎的主要病原体。对该致病原做出准确诊断是正确治疗这种疾病的重要条件。链球菌感染后要选用抗生素治疗，如果未经治疗，可能会引起诸如风湿热之类的严重后遗症1。
检测A群链球菌感染的传统方法是将咽拭子标本培养24-48小时后，证实β溶血菌落是A群链球菌2。阳性结果可通过观察羊血琼脂平板上微生物对杆菌肽的敏感性而获得3，4。基于碳水化合物抗原群特异性可对A群链球菌做出免疫学诊断5。
A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）使用的是免疫层析方法，所用抗体对A群链球菌是特异的。试验设计可对抗原在试剂上进行提取，没有转移步骤，标本完全包含在检测卡中，结果6分钟可得。
【检验原理】
A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种检测咽拭子标本中A群化脓性链球菌抗原的薄膜免疫层析试验。一条吸附到硝酸纤维素膜上的兔抗A群链球菌抗体带，作为样本线，另一条吸附到同一膜上的兔抗种属抗体,作为对照线。结合有可视粒子的兔抗A群链球菌抗体和种属抗体干燥结合到惰性纤维支持物上，形成的结合物垫与带条带的薄膜结合在一起构成检测条。检测条和一个放咽拭子的小孔位于书形检测卡的两侧。
试验时，将咽拭子插入检测卡中，从滴瓶中加入提取试剂，将咽拭子转三圈。温育1分钟后，将检测卡闭合，使提取的标本与检测条接触。A群链球菌抗原被固定的A群链球菌抗体捕获，并与结合物抗体结合。固定的抗种属抗体捕获另一可视结合物，阳性结果5分钟内出现，5分钟读数时的阴性结果表明不存在A群链球菌抗原。
试验结果可用紫红色线的存在与否来解释。阳性结果会出现样本线和对照线两条线，阴性结果只出现一条对照线，其他检测结果表示试验无效。
【主要组成成份】
1. 检测卡：包被有亲和纯化的兔抗A群链球菌多克隆抗体、兔抗羊IgG多克隆抗体、胶体金标记的亲和纯化的兔抗A群链球菌多克隆抗体、胶体金标记的羊IgG多克隆抗体。
2. 提取液1：2M含吐温20的亚硝酸钠液。
3. 提取液2：0.125M含吐温20的醋酸液。
4. 阳性对照拭子：加热灭活的A群化脓性链球菌干燥结合到拭子上。
产品中不包含但必需的组分：
无菌拭子：用于A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）
【储存条件及有效期】
避光、阴凉、干燥处15-30℃保存，有效期为18个月。
【样本要求】
用试剂盒中提供的棉拭子，从咽后部和扁桃体白斑部位取材收集标本6，7，不要触及齿龈、舌颊表面8。标本采集后要立即处理。
要做培养，先用棉拭子在琼脂培养平皿上接种四分之一面积，然后再做A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法），或者另取一份棉拭子标本。用无菌环在平板上划线，以分离菌落9，10。
要在接种培养皿后再用A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）进行测试，因为提取液会使拭子上的细菌灭活。接种培养皿后要立即处理棉拭子。
如果不能立即测试，要将病人拭子放入一个干燥试管中贮存或运输。咽拭子可在2~8℃冷藏 72小时11。
建议不要使用转运培养基做试验。
【检验方法】
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用前将检测卡打开，平放，如下操作： 1. 将标本或对照拭子插入绿三角中，平稳地向上推，使拭子头在三角形上部的孔中可见。 2. 将试剂1瓶垂直置于检测卡上方1到1又1/2英寸处，慢速加入4滴，再向三角形孔 中加入4滴试剂2。 注意：试剂加入不正确会导致结果无效。 3. 顺时针方向（向右）旋转（转动）拭子柄3圈，不要将拭子取出。 4. 等待1分钟。 5. 从检测卡的右侧揭去粘附垫，将检测卡密闭，过5分钟在窗口中读结果。5分钟前或5分钟后读结果都可能不准确。
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质量控制
日常质控：
A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）有内置程式对照。对日常质量控制，Binax建议每批测试都要记录这些对照结果。
程式对照：
对照位置的紫红色线是内在程序控制。如果测试顺利，试剂起作用，这条线始终会出现。
结果窗口的清晰背景色是阴性背景对照。窗口中的背景颜色在5分钟内由淡粉线色变为白色。背景色不会妨碍试验读数。
外部阴性和阳性对照：
良好实验室操作规范建议用阴、阳性对照来确保：
· 试剂有效；
· 试验操作（包括抗原提取）正确。
A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）的试剂盒内有一根阳性对照拭子，该拭子和相应的阴性对照一起监控整个试验过程。每打开一盒新试剂盒都要做阴阳性对照。
为了证明下述各项可用其他质控品进行测试：
· 地方、州和/或联邦法规；
· 授权群体和/或；
· 实验室标准质量控制程序
正确的QC指导规范参见CLSI EP12-A和42CFR493.1256（仅限于美国用户）
其他阴性、阳性对照拭子也可以单独购买（产品号#730-010）。做对照时，像病人标本一样操作即可。
未得到正确的对照结果时，不要报告病人结果。可在正常工作时间与与客服人员联系（EST）。
【检验结果的解释】
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阴性结果 将只在窗口的上半部分出现一条紫红色对照线，表示结果是阴性的。对照线意即试验操作正确，只是未检测到A群链球菌抗原。
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质控线 样本线
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阳性结果 将出现两条紫红色线，这表示检测到A群链球菌抗原。低水平抗原标本可给出一条暗淡的样本线。 任何可见的紫红色样本线都是阳性的。
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质控线 样本线 |
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无效结果 如果没有线条出现，或仅出现样本线，试验是无效的。无效样品应当用新的样本重新检测。 |
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质控线 样本线 质控线 样本线 |
【检验方法的局限性】
A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）不能区分死菌和活菌。由于A群链球菌死菌抗原的存在，新近接受过A群链球菌或类似感染治疗的病人在有效治疗一段时间内仍会出现阳性结果。
咽炎也可由A群链球菌以外的细菌引起。当实验室诊断与临床表现不符时，要做包括细菌培养在内的进一步诊断。
A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）不能区分A群链球菌的无症状携带者和感染者。如果提取抗原的数量在敏感性以下，可能得到一个阴性结果。建议对所有A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）阴性结果做培养证实12。
在A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）中用一根拭子既做接种又做快速诊断，可能会降低敏感性。
【产品性能指标】
操作特性
敏感性分析
通过测定化脓性链球菌（ATCC 编号码19615）培养物的稀释液来做敏感性研究，确定的A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）的检测限是1.8×105CFU,此外,一株粘液样A群链球菌在105 CFU用A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）测试是阳性。对链球菌用标准微生物学方法进行了定量检测。
临床敏感性和特异性
用A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）评价了145份从咽炎病人采集的咽拭子标本。每根拭子在用A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）检测前都接种了一份SXT选择培养基。培养基在33-37℃5%二氧化碳环境中孵育18-48小时。β溶血菌落被胶乳凝集试验证实是A群链球菌。下面总结的结果和A群链球菌快速层析免疫测定操作特性是一致的13，17。
在该项研究中，试验敏感性是92%（36/39），95%可信区间是84-100%，试验特异性是100%（106/106），总符合率是98%（142/145），95%可信区间是96-100%。
特定人群中阳性培养标本所占比例低对敏感性有影响。A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）测出了5例培养1+阳性标本中的4例，16例培养2+阳性标本中的14例，10例培养3+阳性标本中的10例，8例培养4+阳性标本中的8例。
重复性研究
在三家医师办公室用一组编码标本对A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）进行了单盲研究，试验由具有不同教育背景的医师办公室专业人员来完成。本组标本包括阴性、弱阳性、阳性、强阳性标本。3天中在各家医院对每一标本水平进行了15次测定。
每一家医院所得结果与预期结果的符合率为98%-100%。院内、院间以及临床医生和非临床医生间都无显著性差异。
交叉反应性
对浓度在1×107菌体/测试以下的23种细菌用A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）进行检测，未产生交叉反应：百日咳鲍特菌、白色假丝酵母菌、假白喉棒状杆菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、流感嗜血杆菌B型、肺炎克雷伯氏菌、卡他莫拉氏菌、浅黄色奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌、铜绿假单胞菌、黏质沙雷菌、金黄色葡萄球菌、表皮萄葡球菌、无乳链球菌，肺炎链球菌，C群链球菌，F群链球菌，G群链球菌，温和链球菌，突变链球菌，血链球菌。
干扰物质
A群链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）在服用2种咽痛药（包括Vicks Chloraseptic喉痛喷雾剂和Vicks Chloraseptic喉片）以后，阴性标本和阳性标本检测结果不受影响。总符合率是100%。
【注意事项】
1. 该试剂仅适用于体外诊断一次性使用，包装破损不应使用。
2. 该试剂盒内的检测卡必须按要求贮存在15-30℃环境中，直至失效期为止，过期的试剂不要使用。
3. 操作过程中操作方法及加液量必须准确，否则会出现无效结果。
4. 抽提液1具有一定腐蚀性，操作时避免与皮肤和眼睛接触。
5. 实验完毕后，建议将所有与该实验相关具有潜在传染性的物质按相应的生物安全规定处理。
6. 试剂盒内所有配件只适用于Binax NOW Strep A Test。
【参考方献】
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4. Levinson, M.L., and P.F. Frank. J. Bacteriology 69:284-287, 1955.
5. Youmans, G.P.,Paterson, P.Y., and Sommers H. M. The Biological and ClinicalBasis of Infectious Disease, 1975. pp. 172-185.
6. Hoeprich, P.D. Inf. Diseases, Harper & Row, 1983.
7. Manual of Clinical Microbiology, 6th Edition, ASM 1995, pp. 19, 28.
8. Facklam, R. R. Isolation and identification of streptococci. Part 1. Collection,transport and determination of hemolysis. CDC Publication, 1977.
9. Manual of Clinical Microbiology, 6th Edition, ASM 1995, pp. 300-302.
10. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, 9th Edition, The C.V. Mosby Company,1994, pg. 92.
11. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, 9th Edition, The C.V. Mosby Company,1994, pp. 56-57.
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【产品标准编号】YZB/USA 0175-2011
【说明书批准及修改日期】2011年3月14日
