牛布鲁氏菌病抗体检测试剂盒使用说明书

广州健仑生物科技有限公司

【产品名称】

通用名：羊布鲁氏菌病抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Brucella（ELISA）

【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒

【预期用途】 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌（Brucella）引起的人、畜共患传染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流产、不育和各种组织的局部病灶。

本试剂用于检测羊血清中布鲁氏杆菌抗体，可用于布鲁氏菌疫苗免疫效果评价。

【原    理】

   【试剂盒组成】 

序号 名称 规格（96T×1） 规格（96T×2）

1. 酶标板 96T×1 96T×2

2. 酶标记物  (红盖) 11ml×1 11ml×2

3. 样品稀释液 (黄盖) 50ml×1 50ml×1

4. 20X浓缩洗涤液 40ml×1 40ml×1

5. 底物液A  (白盖) 6ml×1 11ml×1

6. 底物液B  (黑盖) 6ml×1 11ml×1

7. 终止液  (黄盖) 6ml×1 11ml×1

8. 阳性对照  (红盖) 1.0 ml×1 1.5 ml×1

9. 阴性对照  (绿盖) 1.0 ml×1 1.5 ml×1

10. 盖板膜 1张 2张

11. 自封袋 1个 1个

12. 说明书 1份 1份

【储存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.15，阳性对照≥0.6。

【检验结果的解释】

1. 样品A值≥0.38为阳性；样品A值＜0.38为阴性。

2.本实验结果为阴性时表明羊只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

    该试验仅作为定性检测羊血清、血浆中布鲁氏菌抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。