特殊植物基因组DNA提取试剂盒(多酚/多糖植物组织)

试剂盒组成：

Mini Column 50

2 ml Collection Tube 50

Buffer KB (Column solution) 15 ml

Buffer KSL2 (lysis solution ) 2×30 ml

Buffer KBL1 (Lysis solution) 2×30 ml

Buffer KW1(Wash solution ) 50 ml

Buffer KW (Wash solution ) 使用前加入 50 mL 无水乙醇

Buffer KE (Elution solution) 15 ml

储存条件：本试剂盒在室温（15-25 ℃）下可保存一年。

产品特点：

Plant Genomic DNA Extraction Kit 采用独特的疏水膜技术， 彻底去除植物组织细胞中蛋白,多酚多糖和大部分 RNA 等各种干扰物，提取高纯度的 DNA。试剂盒采用独特的缓冲系统，可从不同类型的植物中快速提取基因组 DNA。一般情况下，100 mg 新鲜组织的基因组 DNA 产量可达5-30 μg。本试剂盒适宜从棉花，烟叶等富含多酚多糖类植物中提取总 DNA。其他普通植物 DNA 的提取也可选用此试剂盒，或者选用普通植物 DNA 试剂盒 K2304。

注意事项：

1.实验前准备工作：详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分、研钵、研棒、药匙、1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管以及 37 ℃和 65 ℃ 的温浴条件。

2.KSL2 和 KBL1 和 KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀，在 37-65 ℃ 温浴片刻即可。

3.Buffer KW 第一次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水乙醇,并在室温下保存，不能置于低温环境。如在低温时，在 37-65 ℃温浴片刻即可。每次使用后，请立即拧紧盖子。

操作步骤：

（一）平衡吸附柱

1.取一Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上（已备）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内，室温 13 000 rpm 离心 1 min，使平衡液完全流过柱子。弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。

注意：柱子不平衡，将导致 DNA 产率减少。

（二）样品处理

2.组织破碎：可根据不同样品研磨难易程度选择以下方法：

1）液氮研磨：将 50-100 mg 组织直接放入研钵，加入少量液氮，迅速研磨，再加少量液氮，再研磨，如此三次，将样品研成粉末。用药匙迅速将样品干粉按 100 mg 组织/1000 μl KSL2 的比例加入一新的 1.5 ml 离心管中。加入 KSL2 后，震荡混匀.。室温 13 000 rpm 离心 5 min。

2）直接研磨：对于新鲜植物组织，将 50-100 mg 组织直接放入研钵， 按 100 mg 组织/1000 μl KSL2 比例加入 KSL2，直接在 KSL2 中将样品研磨匀浆后，转入 1.5 ml 离心管（推荐）。室温 13 000 rpm 离心 5 min。弃沉淀， 上清液待转移。

注意：1）如果样本的 DNA 含量少，可以适当加大样品的量。

2）尽量使用新鲜样品，或者样品取得后立即直接保存于液氮或

者-70 ℃。

3.小心将上清液转至干净的 2 ml 离心管，加入 1.0-1.5 倍体积的异丙

醇，混匀 13 000 rpm 离心 5 min。 弃去上清，保留沉淀，在沉淀中加 100 μl KE 彻底溶解，再加入 1000-1500μl KBL1，混匀，如有沉淀，请离心去沉淀。

（三）吸附

4.将混合液转移到平衡过的吸附柱内，室温 13 000 rpm 离心 30 s，使裂解液完全流过柱子。弃去收集管中的过滤液，把柱套回收集管中。

注意：1）室温太低可能造成 KBL1 混浊或沉淀，在 37 ℃温浴片刻即可。

2）如上清液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过 700

μl。

5.（可选）加入 30 μl  浓度为 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上，37 ℃

放置 5-10 min。

注意：本试剂盒没有配备 RNase A 溶液。一般来说，这一步没有必要，因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有吸附能力。如果实验要求不能残留微量RNA，可采用这一步处理。

(四) 漂洗

6.加入 700 μl Buffer KW1，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

7.加入 700 μl Buffer KW，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。注意：Buffer KW 在*使用之前必须加入 50 ml 无水乙醇，并置于室温下保存。

8.（可选）重复用 700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子，室温 13 000 rpm

离心 1 min。（注意：用 70%乙醇漂洗有利于提高 DNA 纯度）

9.弃去收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。室温下，13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。

注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。(五)洗脱

10.把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上，加入 50 μl 的 KE（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0），65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。（也可以将 KE 预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）

注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖。

11.DNA 应保存于 4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃。

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