疾控试题专用志贺氏菌抗原快速检测试剂条
日本生研的细菌诊断试剂世界知名。其细菌分型抗血清的产品基本上垄断临床微生物市场和日本的公共卫生检测实验室。广州健仑生物科技公司有相关各类血清产品,包括志贺氏菌,大肠埃希氏菌,沙门氏菌,肠炎弧菌,军团菌,李斯特菌等。详情可直接联系公司工作人员。
(QQ:2042 552 662 MOB:1380 2525 278杨永汉)
【预期用途】
本品主要用于志贺菌检测鉴定及突发公共卫生事件的处置,还可用于志贺菌的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断。
仅供研究、不用于临床诊断!
【检测原理】
本试剂盒采用聚合酶链式扩增(PCR)及TaqMan荧光探针技术,对志贺菌特异性核酸序列进行扩增并检测,从而判断志贺菌的存在。
【试剂盒组成】
序号 | 组分 | 数量 | 规格 |
1 | qPCR Master Mix | 1 | 625μl/管 |
2 | 志贺菌反应液 | 1 | 375μl/管 |
3 | 志贺菌阳性对照 | 1 | 50μl/管 |
4 | RNase Free H2O(阴性对照) | 1 | 100μl/管 |
【储存条件及有效期】
-20℃避光贮存,避免反复冻融。有效期12个月(请于有效期内使用)。
【适用仪器】
ABI PRISM®7900、ABI PRISM®7500、ABI PRISM®7300、ABI PRISM®7700、ABI PRISM®7000、MJ Opticon 、BIORAD iCycler 、Roch LightCyclerTM、Qiagen Rotor Gene等。
【样本要求】
样本采集后应及时检测,否则应-20℃保存,避免反复冻融,使用干冰或液氮运输。
【检验方法】
1.试剂准备(试剂准备区)
反应液组份 | 加量 (μl) |
qPCR Master Mix | 12.5 |
志贺菌反应液 | 7.5 |
待测标本DNA | 5 |
总体积 | 25 |
2.样本处理(样本处理区)
2.1取200μl的待检样本及阴性对照样本进行核酸提取。DNA可采用Trizol法、硅胶膜吸附法、磁珠法等微量DNA提取试剂盒提取,按相应说明书要求进行操作。提取好的DNA应及时用于检测,否则应 - 20℃保存。
2.2加样:在准备好试剂的PCR反应管中分别加入阴、阳性质控品、待测样本DNA各5μl,盖紧管盖后,瞬时低速离心。
3.PCR扩增检测(扩增区)
待检PCR管转移至扩增区,按顺序置于PCR仪上,编辑样本信息,设定循环参数(请参照各类仪器的操作说明进行设置)。
步骤 | 温度(℃) | 时间 | 循环数(次) | |
1 | 预变性 | 95 | 5分钟 | 1 |
2 | 变性 | 95 | 10秒 | 40 |
退火、延伸及检测荧光 | 58 | 45秒 | ||
步骤2中58℃时荧光检测,检测通道:FAM |
*注:ABI系列荧光PCR仪不选ROX校正,淬灭基团选择None。
4.结果分析
ABI7500荧光PCR仪:将 baseline设为3-15(根据实际情况,baseline cycler可在一定范围内变化),荧光阈值(threshold)设定原则以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线(无规则的噪音线)的*点,且Ct值=40(或显示为undet)。使用仪器配套软件自动分析结果。
5.质量控制
试剂盒中提供阳性质控品、阴性对照各一个,对应Ct值分别为Ct阳、Ct阴;如试剂质量完好并操作正确,Ct阳< Ct阴,Ct阳<30,并呈现典型的S型扩增曲线,否则实验无效,应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的误差。在每次检测中应设置阴阳性对照品。